Diagnóstico Micológico - RECOLECCION Y TRANSPORTE DE MUESTRAS, EXAMEN MICOLOGICO - Micosis Superficiales

En micología la observación directa del hongo en el material tiene valor diagnóstico por si sola debida al carácter de patógeno primario del microorganismo: éste es el caso de los dermatofitos. Cuando desarrolla en cultivo un hongo saprófito o comensal, es necesario determinar su importancia clínica en base a las características del paciente. De esto surge la importancia de la observación de la lesión por parte del micólogo y de la buena toma de muestra para llegar a un buen resultado.

RECOLECCION Y TRANSPORTE DE MUESTRAS

La calidad del diagnóstico de las micosis depende de las calidad y cantidad del material recogido del paciente, de las condiciones de envío, conservación, transporte y procesamiento y de la pericia del micólogo.
Las muestras deben ser representativas, abundantes, libres de contaminantes exógenos o endógenos, y de sustancias que inhiban o alteren la viabilidad de los hongos.
Para asegurar la calidad de la muestra no hay nada mejor que la toma de muestra la realice el micólogo, la inocule en los medios de cultivo, y la procese para la observación microscópica.
Es conveniente recoger los espécimen en recipientes estériles irrompibles y tamaño adecuado y conservarlas a temperatura ambiente.

• Indicaciones previas al paciente:
- Suspender la medicación antifúngica interna y/o externa durante un lapso no inferior a las 72 horas antes de efectuar la toma de muestra; de igual modo se suspende el uso de pomadas, talcos, tinturas u otras sustancias que enmascaren la presencia, inhiban o alteren la viabilidad de los hongos.
- Lavar la superficie afectada con agua y jabón blanco no perfumado tres veces por día durante tres días previos a la toma de muestra.
- Las uñas deben higienizarse además con un cepillo blando y no deben estar pintadas.


• Preparación del sitio para la toma de muestras:
- En el momento de la toma de muestra se desinfecta con alcohol 70º utilizando una gasa estéril. Si se sospecha una infección por levaduras desinfectar con solución fisiológica ya que estas pueden se susceptibles a la acción del alcohol.
- Materiales:
a) cinta adhesiva transparente
b) bisturí
c) pinza de depilar
d) placa de Petri estéril
e) porta-objetos
f) diferentes tipos de ansa
g) agar Saboureaud
h) agar Lacrimel
i) agar DTM

Siempre es necesario tener tubos con medios de cultivo en lugar de la toma de muestra ya que a veces el material es escaso y en esos casos se recomienda realizar directamente la inoculación a los medios de cultivo.


• Métodos de obtención de muestras
a) Cinta adhesiva transparente: se aplica un fragmento de cinta de 10 cm sobre la lesión y se
presiona raspando con el borde lateral de la uña, la superficie de la cinta que cubre la zona afectada para que se adhieran las escamas. La cinta se retira y se aplica sobre una lámina porta-objetos limpia, rebatiendo los extremos hacia abajo para que no se despegue. Es conveniente tomar dos o tres improntas y montarlas individuales

b) Raspado: se utiliza para todas las lesiones descamativas de la piel glabra (sin pelo) en
especial aquellas de gran tamaño. Para obtener el material se raspa el borde activo de la lesión con bisturí estéril . Cuando la lesión afecta los pliegues interdigitales el material se toma del borde de las lesiones, junto a la piel sana de los dedos o de la planta del pie, evitando las áreas maceradas; si la lesión afecta las uñas se raspa la cara profunda de la superficie afectada, próxima a la región sana de la uñas y el lecho subungueal ( se elidirán las zonas friables, de color anormal o hiperqueratósicas) Se debe recoger abundante cantidad de material.

c) Depilación: se utiliza en las lesiones de cuero cabelludo y otras áreas pilosas, y para recoger
el vello de la piel cuando el folículo está inflamado (tinea corporis). La muestra se toma con pinza depilatoria estéril aplicada perpendicularmente a la superficie de la piel y siguiendo el sentido del pelo. Se deben extraer 20 pelos enfermos y las escamas circulantes.


• Transporte y conservación de muestras
Es preferible el transporte inmediato al laboratorio, pero no es imprescindible ya que los hongos que producen micosis superficiales pueden ser aislados de las muestras luego de varias semanas si el recipiente donde se han recolectado no tiene humedad.


EXAMEN MICOLOGICO

• Examen microscópico directo
- Colocar una porción del material entre porta-objetos y cubreobjetos con KOH ( 10 – 40 % ) ó KOH en partes iguales con tinta Parker azul permanente ( sin hervir ) ó después de dejar durante toda la noche ( en cámara húmeda ). También se puede utilizar agua glicerinada, lo que permite observar los preparados hasta 72 hs sin que se alteren ni se sequen.
- Cuando e espécimen a examinar es una impronta tomada con cinta adhesiva por sospecha de pitiriasis, se coloca entre el portaobjetos y la cinta una gota de azul de metileno 1 %, dejar 10 minutos a temperatura ambiente
- Si se sospecha eritrasma, se deben digerir las escamas con KOH al 20 – 40 % durante toda la noche, luego se lavan las escamas 4 – 5 veces con agua destilada . Fijar con suero, hacer coloración de GRAM y Kinyoun. Se considera positiva cuando se observan filamentos finos y elementos cocoides irregularmente teñidos Gram positivos ó parcialmente ácido alcohol resistentes con Kinyoun.


• Cultivos
De rutina:
- DTM, Saboreaud y Lacrimel.........................25 – 28ºC durante 4 semanas con observación semanal.
- Medio de Bilis de Feo...................................25 – 28ºC durante 48 hs y hasta 5 días. Buscar levaduras.
- Saboureaud Sangre ó Agar Sangre (sospecha de eritrasma) ...........................37ºC durante 5 días en CO2. Para investigar Corynebacterium minutissimun (Nocardia ).

• Identificación de cepas

- Dermatofitos: Los dermatofitos pueden ser identificados por sus formas características macro y microscópicas y el auxilio de unas pocas pruebas complementarias

- Levaduras: Cada laboratorio debe decidir respecto a la identificación se considera suficiente identificar Candida albicans y derivar el resto de las cepas a Centros de Referencia.

Algoritmo para el Diagnóstico de Micosis Superficiales